6分鐘前 湖北GISH免費咨詢 貝科新肽科技公司[貝科新肽a5f8c59]內(nèi)容：原位雜交法是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行定量定位的方法。原位雜交法可以在細胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進行。另有熒光原位雜交使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。

原位雜交技術(shù)方法大致可分為：1.雜交前準(zhǔn)備，包括固定、取材、玻片和組織的處理，如何增強核酸探針的穿透性、減低背景染色等；2.雜交；3.雜交后處理；4.顯示（visualization）：包括性自顯影和非性標(biāo)記的顯色。固定原位雜交組織化學(xué)技術(shù)在固定劑的應(yīng)用和選擇上應(yīng)兼顧到三個方面：保持細胞結(jié)構(gòu)，限度地保持細胞內(nèi)DNA或RNA的水平；使探針易于進入細胞或組織。DNA是比較穩(wěn)定的，mRNA是相對穩(wěn)定的但易為酶合成和降解。RNA卻絕然不同，非常容易被降解。因此，對于DNA的定位來說，固定劑的種類和濃度并不十分重要。相反，在RNA的定位上，如果要使RNA的降解減少到低限度，那么，不僅固定劑的種類濃度和固定的時間十分重要，而且取材后應(yīng)盡快予以冷凍或固定。

在ISHH，整個實驗周期是比較長的，實驗程序也比較繁雜，而雜交在ISHH整個實驗中可被認為是“短兵相接”的一步。雜交前的一切準(zhǔn)備工作如增加組織通透性都是為了在雜交這一步驟中核酸探針能進入細胞或組織與其內(nèi)的靶核苷酸相結(jié)合。因此，雜交是ISHH中關(guān)鍵的而且是重要的一個環(huán)節(jié)。雜交是將雜交液滴于切片組織上，加蓋硅化的蓋玻片，防止孵育過程中的高溫（50℃左右）導(dǎo)致雜交液的蒸發(fā)。為保證雜交所需的濕潤環(huán)境，可將其放在盛有少量5×SSC或2×SSC（standard saline citrate, SSC）溶液的硬塑料盒中進行孵育。雜交液的成分和預(yù)雜交液基本相同，所不同的是加入了標(biāo)記的核酸探針和硫酸葡聚糖。