4分鐘前 植物RNA原位雜交檢測技術服務來電咨詢「多圖」[科銳諾44070b2]內容：

原位雜交第二天

1.

1）將探針回收，放于－20C保存（通常探針可重復使用十次左右）。

2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。

3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。

4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。

2.

1）用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。

2）室溫下加1ml 1：2：7溶液，時間為一小時。

3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過夜。

目前，我國已穩定開展的分子病理技術主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、基因芯片和DNA測序技術DNA原位雜交主要用于基因定位、特異基因(如病原微生物基因)檢測等;RNA原位雜交則用于基因表達檢測。原位雜交技術的優點是操作簡單，可直接定位組織，價格低廉，信號穩定，儲存方便，可做組織學評價，是目前應用較多的分子病理技術之一。

滴加封閉液：37℃30分鐘。甩去多余液體，不洗。

.滴加生物素化鼠抗地1高辛：37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

滴加SABC：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

滴加生物素化過氧化物酶：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑Ａ，Ｂ，C各一滴，混勻，加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現則可繼續顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

.蘇1木素復染，充分水洗。

酒精脫水，二甲1苯透明，封片。