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將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過(guò)夜。雜交期間,盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán),以防液體蒸發(fā)。
雜交結(jié)束后,去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次,同時(shí)應(yīng)避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時(shí)。此時(shí)已可進(jìn)行自顯影。如背景很高或?qū)嶒?yàn)要求嚴(yán)格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
原位雜交是一項(xiàng)非常重要的生物技術(shù),可以用于研究基因表達(dá)和調(diào)控,檢測(cè)基因變異和染色體異常,監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡,以及識(shí)別特定的細(xì)胞類型或組織。然而,它需要特殊的操作技術(shù)和設(shè)備,以及嚴(yán)格的對(duì)照實(shí)驗(yàn)才能獲得可靠的結(jié)果。