細胞分化

細胞分化是指同一來源的細胞逐漸產生出形態結構、功能特征各不相同的細胞類群的過程，其結果是在空間上細胞產生差異，在時間上同一細胞與其從前的狀態有所不同。實驗流程：慢病毒質粒構建-HEK293T細胞培養-質粒轉染293T細胞-病毒收集-病毒純化-病毒滴度檢測-細胞-穩轉細胞篩選-穩轉細胞鑒定結果示例：圖A病毒滴度檢測。細胞分化的本質是基因組在時間和空間上的選擇性表達，通過不同基因表達的開啟或關閉，終產生標志性蛋白質。細胞誘導是指將一群不同類型或者形態結構、功能特征存在差異的細胞通過生物學、物理學等手段，將之轉變為具有相似/相同形態結構、功能特征的細胞群體的過程。

Q:中可能出現的沉淀物是什么？

A:基于多年的實驗研究，用于細胞培養的胎牛以及其它中可能會存在以下種類的沉淀物：

（1）纖維蛋白，它是經常出現的較大的沉淀物，可以達到 1-2mm，可以用肉眼觀察到。2、將細胞懸液作梯度倍數稀釋，每組細胞分別以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分別接種含10mL37預溫培養液的皿中，并輕輕轉動，使細胞分散均勻。因為都是在低溫下進行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體）在處理過程中仍然處于溶解狀態，當經過的過濾分裝后，就會在瓶中凝結出現纖維蛋白沉淀。

（2）磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使出現渾濁，并且在 37℃ 培養的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點， 這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經常被誤認為是微生物污染。

（3）膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質。他們也是中出現沉淀物的常見原因。

關于細胞凍存的注意事項：

1. 為保持細胞大存活率，一般都采用慢凍存融的方法。

2. 凍存物距液氮面越近溫度越低。干細bao培養誘導分化干細bao是一類具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞，理論上具有無限分裂能力，在特定條件下，可分化成特定組織。標準的低凍速度為－1℃~12℃/ 分鐘，當溫度下降達－25℃時，下降速度可增至－5~－10℃/ 分鐘，到－100℃時則可迅速凍入液氮中。因此要適當掌握凍存物下降入液氮中的速度，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促冰晶形成。

3. 初次凍存者在下降凍存時，宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置，然后需用溫度計與凍存物并行的辦法，以觀測下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關系，當已掌握以上各參數和凍存技術熟練后，僅按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果。

4. 各種細胞對凍存速度的要求也不一樣；上皮細胞和成纖維細胞耐受性可能大些，－2~－3℃/ 分鐘合適；胚胎細胞耐受性較小，不宜太快。總之在一開始時，下降速度不能超過－10℃/ 分鐘。

5. 用什么防護劑合適和用量多大，要依細胞而定，初代培養細胞用 DMSO 較好，一般細胞可用甘油；用量以較小為好。有人認為膚上皮細胞貯存在 20%-30% 甘油中很好。

6. 原則上細胞在液氮中可貯存多年，但為妥善起見，凍存一年后，應再復蘇培養一次，然后再繼續凍存。

7. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免

8. 注意自身的安全，對于來自人源性或病毒的細胞株應特別小心。操作過程中，應避免引起氣溶膠的產生，小心有毒性試劑例如 DMSO，并避免尖銳物品傷人等。