DNA測序檢測
1. PCR測序反應
(1)取0.2ml的PCR管，用記號筆編號，將管插在顆粒冰中，按下表加試劑:
所加試劑測定模板管標準對照管
BigDye Mix
1μl
1μl
待測的質粒DNA
1μ 1
pGEM-3Zf (+)雙鏈DNA
-1μ1
待測DNA的正向引物
1μ 1
M13(-21)引物- 1μ 1
滅菌去離子水
2μ 1
2μ 1
總反應體積5μ 1,不加輕礦物油或石蠟油，蓋緊PCR管，用手指彈管混勻，稍離心。
(2)將PCR管置于9600或2400型PCR儀.上進行擴增。98C變性2min后進行PCR循環(huán)，
PCR循環(huán)參數(shù)為96C 10s， 50C 5s， 60°C4min， 25 個循環(huán)，擴增結束后設置4C保溫。
2.乙醇法純化PCR產物
(1) 將混合物離心，將擴增產物轉移到1.5ml EP管中。
(2)加入25μ 1/乙醇混合液，充分振蕩，置冰上10min以沉淀DNA。12 000r/min于
4C離心30 min,小心棄上清。
(3)加70%(V/V)的乙醇50μ 1 洗滌沉淀2次。12 000r/min 于4C離心5min,小心棄上清和
管壁的液珠，真空干燥沉淀10~ 15min。
3.電泳前測序PCR產物的處理。
(1)加入12μ 1的TSR于離心管中，劇烈振蕩，讓其充分溶解DNA沉淀，稍離心。
(2)將溶液轉移至蓋體分離的0.2ml PCR管中，稍離心。
(3)在PCR儀上進行熱變性(95C 2min),冰中驟冷，待_上機。
4..上機操作按儀器操作說明書安裝毛細管，進行毛細管位置的校正，人工手動灌膠和建立
運行的測序順序文件。
5.儀器將自動進行序列分析，并可根據(jù)用戶要求進行序列比較。如測序序列已知，可通過
序列比較以星號標出差異堿基處，提高工作效率。
6.測序完畢按儀器操作規(guī)程進行儀器清洗與保養(yǎng)。
高l效液相色譜法檢驗方法
高l效液相色譜法是一種現(xiàn)代液體色譜法，其基本方法是將具一定極性的單一溶劑或不同比例的混合溶液作為流動相，用高壓輸液泵將流動相注入裝有填充劑的色譜柱，注入的供試品被流動相帶入柱內進行分離后，各成分先后進入檢測器，用記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置記錄色譜圖或進行數(shù)據(jù)處理，得到測定結果。EMSA實驗EMSA:凝膠遷移或電泳遷移率檢測是一種檢測蛋白質和DNA序列相結合的技術，初用于研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用，可用于定性和定量分析。由于應用各種性質的微粒填料和加壓的液體流動相，本法具有分離性能高，分析速度快的特點。
高l效液相色譜法適用于能在特定填充劑的色譜柱上進行分離的藥品的分析測定，特別是多組分藥品的測定、雜質檢查和大分子物質的測定。該研究結果發(fā)表在《NatureBiotechnology》上。有的藥品需要在色譜分離前或后經過衍生化反.應，方能進行分離或檢測。常用的色譜柱填充劑有硅膠用于正相色譜;化學鍵合固定相，根據(jù)鍵合的基團不同可用于反相或正相色譜，其中常用的是十八烷基硅l烷(又稱ODS)鍵合硅膠，可用于反相色譜或離子對色譜離子交換填料，用于離子交換色譜，是有一定孔徑的大孔填料，用于排阻色譜。
RNA酶（Rnase）是導致RNA降解主要的物質。此酶非常穩(wěn)定，在一些的條件下只可暫時失活，但限制因素去除后又迅速恢復活性。常規(guī)高溫高壓滅菌方法和蛋白抑制ji不能使所有的Rnase完全失活。
1.它廣泛存在于人的皮膚上，因此制備RNA時必須戴手套
2.RNase的又一污染源是取液器。根據(jù)取液器制造商的要求對取液器進行處理。一般情況下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內部和外部，可基本達到要求。
3. 塑料制品、玻璃和金屬物品的處理
（1）塑料制品：盡量使用一次性無菌塑料制品。已標明RNase-free的塑料制品，如沒有開封使用過，通常不必再處理。