細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染及解決方法

黑點污染

黑色的游動點能穿透濾膜并在空氣中擴散。它們在低倍鏡下顯示為黑色圓點，在高倍鏡下顯示為可移動的黑點。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小，因此細(xì)胞仍可使用。通常，黑點污染后，細(xì)胞生長良好，運動物體無明顯增加，培養(yǎng)基的顏色和透明度無明顯變化。(autophagicvacuoloAV)2、在熒光顯微鏡下采用GFP-LC3融合蛋白來示蹤自噬形成由于電鏡耗時長，不利于監(jiān)測(Monitoring)自噬形成，人們利用LC3在自噬形成過程中發(fā)生聚集的現(xiàn)象開發(fā)出了此技術(shù)。在同一批培養(yǎng)的細(xì)胞中也可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。

解決方法：黑點對細(xì)胞生長狀態(tài)沒有明顯影響，細(xì)胞增殖后會自然消失，因此除了置換外，無需特殊處理。如果細(xì)胞可能被小的運動點污染，建議增加培養(yǎng)皿細(xì)胞密度，以提高細(xì)胞存活率。

細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染及解決方法

真菌污染

真菌污染后，培養(yǎng)基一般清澈，保持原色。細(xì)絲可以在顯微鏡下觀察到。，一些真菌類似于死細(xì)胞碎片，但其中許多清晰可見，看起來像珊瑚，比較容易區(qū)分。雜交瘤細(xì)胞基因測序雜交瘤細(xì)胞有丟失高特異性高活性的風(fēng)險，或者細(xì)胞狀態(tài)不好乃至。此外，它們會慢慢長出細(xì)細(xì)的黑色細(xì)絲，因為它們生長得比較慢，不像細(xì)菌那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基被污染，它們將很難存活。

解決方法：一旦被真菌污染，果斷丟棄，然后對細(xì)胞房、CO2 培養(yǎng)箱、器皿和培養(yǎng)基進(jìn)行消毒。

Q:如何避免中沉淀物的出現(xiàn)？

A:首先要注意正確的解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：

（1）熱滅活；

（2）在 37℃ 下培養(yǎng)；

（3）反復(fù)凍融；

（4）γ 射線照射；

（5）長期儲存在 2-8℃；

（6）在室溫下放置時間過長

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除這些絮狀沉淀物，可以將分裝到無菌離心管中，以400g離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基 內(nèi)一起過濾。

注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這可能阻塞濾膜。