每批試劑需做驗證檢驗：向一份100mL無菌水樣中接種含有糞大腸菌的質控樣標準菌株，按照上述定量檢測步驟操作觀察結果，看結果是否在其范圍內。

9 注意事項

9.1 如果水樣品有背景顏色，需做一個空白試驗，與標準檢測結果相比較。

9.2 只可使用滅菌水，不含緩沖液的水，不含氧化劑的水進行樣品稀釋。

9.3 此法所用試劑只用于常規水樣，不可用于濃縮水樣。

9.4 如水樣中含有過多的氯，則加入試劑可能顯藍光，則該水樣不可用此方法。

9.5 此法無需在無菌室中進行，但操作過程因避免微生物污染。

9.6 檢測使用過的定量盤應滅菌后棄去。把約30個定量盤放入防爆袋中，用繩子松松的扎住袋口，放入高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃高壓滅菌20min后取出，在防爆袋上注明“生物垃圾已滅菌”方可棄去。

該檢測方法是普遍采用的檢測方法,相比我準的檢測方法,如多管發酵及濾膜法具簡便快捷，其選擇性培養基具有抑制雜菌的作用，假陽性低

酶底物法為GB5750-2006收錄的用于大腸檢測標準方法，酶底物法是目前水中大腸檢測的方法，目前以其方便快捷，假陽性低，適用大量樣品快速檢測等優點正逐步被國內檢測所認可。

相對于多管發酵和濾膜法，酶底物法檢測步驟大大減少，而且對實驗環境要求不高，檢測時間可減少到24小時，在日常水樣監測及應急監測中具有很好的應用前景，可及時檢測，預防，較大限度的減少重大公共安全事故的發生幾率。

檢測原理：

該檢測方法采用大腸產生β-半乳糖苷酶分解色源底物-onPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)使培養液呈黃色。大腸埃希氏菌產生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4 - methyl-umbelliferyl-β-glucuronide）使培養液在波長366 nm 紫外光下產生熒光的原理,來定性定量水中總大腸菌群、糞大腸菌群（耐熱大腸菌群）及大腸埃希氏菌。

酶底物法檢測工作原理酶底物法使用ONPG和MUG兩種營養生長指示劑，其中ONPG試劑在36℃的培養基中會被總大腸菌群產生的特異性β-半乳糖苷酶分解代謝，使水樣從無色變為黃色，在44.5℃的培養基中會被糞大腸菌群(耐熱大腸菌群)產生的特異性β-半乳糖苷酶分解代謝，使水樣從無色變為黃色，MUG試劑在36℃的培養基中會被大腸埃希氏菌產生的特異性β-葡糖醛酸酶分解代謝，使水樣在紫外燈下發出熒光，從而實現水質大腸菌群的檢測。