公司目前擁有多項產(chǎn)品及技術(shù),其中發(fā)明兩項,軟件著作權(quán)八項,實用新型三項,商標(biāo)兩件。公司先后獲得“江蘇省民營科技企業(yè)”、“江蘇省科技型中小企業(yè)”、“江蘇省專精特新中小企業(yè)”等榮譽資質(zhì),連續(xù)多年被評為“東南大學(xué)國家大學(xué)科技園企業(yè)”。結(jié)果:30%percoll密度梯度離心前CD117(c-kit)陽性細(xì)胞占13。2019年公司成為江蘇省生物技術(shù)協(xié)會第七屆理事會的特邀理事,成立了“李冬冬創(chuàng)新工作室”,并獲得了南京市“工人先鋒號”的榮譽稱號。
透射電鏡觀察:可見凋亡細(xì)胞表面微絨毛消失,核染色質(zhì)固縮、邊.集,常呈新月形,核膜皺褶,胞質(zhì)緊實,細(xì)胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和調(diào)亡小體被臨近巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象。
結(jié)果評判:調(diào)亡細(xì)胞體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮。調(diào)亡I期( pro-apoptosis nuclei)的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象( cavitati)的空泡結(jié)構(gòu); IIa 期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;細(xì)胞凋亡的晚期,細(xì)胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生調(diào)亡小體。PI為插入性核酸熒光染料,能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合,其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系,用流式細(xì)胞儀進行分析,就可以得到細(xì)胞周期各個階段的DNA分布狀態(tài),從而計算出各個期的百分含量。
磁性細(xì)胞標(biāo)記方式
應(yīng)用MACS技術(shù)進行磁性細(xì)胞分選重要的一點是高質(zhì)量的標(biāo)記。要盡可能地增強陽性細(xì)胞的標(biāo)記,并減弱背景染色。有兩種基本的磁性標(biāo)記方式:直接標(biāo)記和間接標(biāo)記。
1、直接磁性細(xì)胞標(biāo)記(Direct magnetic cell labeling)
(磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞)直接標(biāo)記是快速、zui特異的磁性標(biāo)記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類靈長類細(xì)胞的MACS直標(biāo)微珠可供選用。
2、間接磁性細(xì)胞標(biāo)記(Indirect magnetic cell labeling )
(磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞,游離于磁場的細(xì)胞為所需細(xì)胞)間接磁性細(xì)胞標(biāo)記需要聯(lián)合使用單ke隆或者多ke隆抗ti和MACS間標(biāo)微珠。未結(jié)合抗ti、生物素化抗ti或者熒光素標(biāo)記抗ti均可作為一抗標(biāo)記細(xì)胞,再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠作為二抗磁性標(biāo)記細(xì)胞。幾乎針對任何種系任何細(xì)胞的任何一種單抗或多抗,均可用于間接標(biāo)記。間接標(biāo)記主要在如下情況時選用:當(dāng)沒有直標(biāo)磁珠時;需要用幾種抗ti的混合物同時分選或去除多種類型的細(xì)胞;間接標(biāo)記有放大作用,因此可在磁性分選抗原表達(dá)弱的目的細(xì)胞時使用;使用自備或者配體的磁珠分選中。2作為標(biāo)志分子,percoll離心后細(xì)胞懸液經(jīng)FACS分選后獲得細(xì)胞純度。( -般而言,陰性分離法的磁珠用量比陽性分離法的大,陽性分離法用行更多。)