小鼠成骨細胞和破骨細胞共培養模型的建立

細胞之間的相互調控作用奠定基礎.方法利用24 h內新生小鼠顱骨和4~8周齡成年小鼠四肢長分別分離、培養成骨細胞和破骨細胞，采用間接接觸的培養模式將接種了骨sui單核細胞的玻片或骨片置入提前24 h接種了成骨細胞的培養皿中進行共培養.共培養-定時間后進行破 骨細胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP染色鑒定和骨吸收功能檢測，并進一 步采用RT- PCR對破骨細胞標志酶基因基質金屬蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和組織蛋白酶K (Cathepsin K )的表達進行檢測結果共培養5天后可觀TRAP(+)多核細胞形成13天TRAP(+ )多核細胞數目達到高峰;骨吸收陷窩在共培養7天后開始出現,隨著培養時間的延長,陷窩面積呈增加趨勢;破骨細胞標志基因TRAP在共培養3天時開始表達，而MMP-9和Cathepsin K則在共培養5天后表達結論共培養體系中成骨細胞對破骨細胞調控作用顯著誘導的破骨細胞具有噬骨能力，該共培養模型可用于成骨細胞和破骨細胞之間的相互調控作用研究.

細胞培養中常見的生物污染包括細菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。這些污染在細胞培養中的特點及相應的解決辦法如下：

1.細菌污染

細菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細砂狀。根據gan染菌的種類不同，可能會呈現不同的形狀，培養液一般會變得渾濁、黃色，對細胞生長有明顯影響。

解決方法：仔細檢查器具的滅菌情況，確保通風時間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養基接觸的移液管等物品如果被污染兩次，則可能會導致儲存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要檢查培養基的渾濁度。此外，建議在培養基中添加抗生su。1、直接磁性細胞標記(Directmagneticcelllabeling)(磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞)直接標記是快速、zui特異的磁性標記方法。

選擇實驗外包公司需要注意哪些事項？

技術支持

盡量有專門的技術負責對接項目，或者有技術服務群。隨時溝通項目問題，定期匯報實驗進展。這樣能把控實驗進度，結果數據有疑問也可以交流，不要實驗做完就沒人管了。

實驗數據

明確提供實驗原始數據、原始圖片，并有保密協議不外傳數據和客戶的信息。確保實驗結果的完整性、唯獨性、真實性。這也是找實驗外包很關心的原則。另外結果盡量有實驗報告形式，包含所用材料、實驗步驟和結果統計分析，方便寫文章時直接使用。2作為標志分子,percoll離心后細胞懸液經FACS分選后獲得細胞純度。另外實驗都是有不確定性的，如果外包公司能保證一定能做出預期的結果，那多半是不靠譜的。做實驗不怕出問題，的外包公司會負責到底，有問題反饋再處理就好。

Q:如何避免中沉淀物的出現？

A:首先要注意正確的解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動。我們已經發現在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應該盡量避免：

（1）熱滅活；

（2）在 37℃ 下培養；

（3）反復凍融；

（4）γ 射線照射；

（5）長期儲存在 2-8℃；

（6）在室溫下放置時間過長

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除這些絮狀沉淀物，可以將分裝到無菌離心管中，以400g離心，上清液即可直接加入到培養基 內一起過濾。

注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這可能阻塞濾膜。