小鼠成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞共培養(yǎng)模型的建立

細(xì)胞之間的相互調(diào)控作用奠定基礎(chǔ).方法利用24 h內(nèi)新生小鼠顱骨和4~8周齡成年小鼠四肢長(zhǎng)分別分離、培養(yǎng)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞，采用間接接觸的培養(yǎng)模式將接種了骨sui單核細(xì)胞的玻片或骨片置入提前24 h接種了成骨細(xì)胞的培養(yǎng)皿中進(jìn)行共培養(yǎng).共培養(yǎng)-定時(shí)間后進(jìn)行破 骨細(xì)胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP染色鑒定和骨吸收功能檢測(cè)，并進(jìn)一 步采用RT- PCR對(duì)破骨細(xì)胞標(biāo)志酶基因基質(zhì)金屬蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和組織蛋白酶K (Cathepsin K )的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果共培養(yǎng)5天后可觀TRAP(+)多核細(xì)胞形成13天TRAP(+ )多核細(xì)胞數(shù)目達(dá)到高峰;骨吸收陷窩在共培養(yǎng)7天后開始出現(xiàn),隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),陷窩面積呈增加趨勢(shì);破骨細(xì)胞標(biāo)志基因TRAP在共培養(yǎng)3天時(shí)開始表達(dá)，而MMP-9和Cathepsin K則在共培養(yǎng)5天后表達(dá)結(jié)論共培養(yǎng)體系中成骨細(xì)胞對(duì)破骨細(xì)胞調(diào)控作用顯著誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞具有噬骨能力，該共培養(yǎng)模型可用于成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞之間的相互調(diào)控作用研究.

細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染包括細(xì)菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點(diǎn)污染、真菌污染和原生動(dòng)物污染。這些污染在細(xì)胞培養(yǎng)中的特點(diǎn)及相應(yīng)的解決辦法如下：

1.細(xì)菌污染

細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀。根據(jù)gan染菌的種類不同，可能會(huì)呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會(huì)變得渾濁、黃色，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯影響。

解決方法：仔細(xì)檢查器具的滅菌情況，確保通風(fēng)時(shí)間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養(yǎng)基接觸的移液管等物品如果被污染兩次，則可能會(huì)導(dǎo)致儲(chǔ)存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要檢查培養(yǎng)基的渾濁度。此外，建議在培養(yǎng)基中添加抗生su。1、直接磁性細(xì)胞標(biāo)記(Directmagneticcelllabeling)(磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞)直接標(biāo)記是快速、zui特異的磁性標(biāo)記方法。

選擇實(shí)驗(yàn)外包公司需要注意哪些事項(xiàng)？

技術(shù)支持

盡量有專門的技術(shù)負(fù)責(zé)對(duì)接項(xiàng)目，或者有技術(shù)服務(wù)群。隨時(shí)溝通項(xiàng)目問(wèn)題，定期匯報(bào)實(shí)驗(yàn)進(jìn)展。這樣能把控實(shí)驗(yàn)進(jìn)度，結(jié)果數(shù)據(jù)有疑問(wèn)也可以交流，不要實(shí)驗(yàn)做完就沒(méi)人管了。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

明確提供實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)、原始圖片，并有保密協(xié)議不外傳數(shù)據(jù)和客戶的信息。確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的完整性、唯獨(dú)性、真實(shí)性。這也是找實(shí)驗(yàn)外包很關(guān)心的原則。另外結(jié)果盡量有實(shí)驗(yàn)報(bào)告形式，包含所用材料、實(shí)驗(yàn)步驟和結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析，方便寫文章時(shí)直接使用。2作為標(biāo)志分子,percoll離心后細(xì)胞懸液經(jīng)FACS分選后獲得細(xì)胞純度。另外實(shí)驗(yàn)都是有不確定性的，如果外包公司能保證一定能做出預(yù)期的結(jié)果，那多半是不靠譜的。做實(shí)驗(yàn)不怕出問(wèn)題，的外包公司會(huì)負(fù)責(zé)到底，有問(wèn)題反饋再處理就好。

Q:如何避免中沉淀物的出現(xiàn)？

A:首先要注意正確的解凍步驟，而且溶解過(guò)程中一定要每隔一段時(shí)間均勻而緩慢的搖動(dòng)。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：

（1）熱滅活；

（2）在 37℃ 下培養(yǎng)；

（3）反復(fù)凍融；

（4）γ 射線照射；

（5）長(zhǎng)期儲(chǔ)存在 2-8℃；

（6）在室溫下放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除這些絮狀沉淀物，可以將分裝到無(wú)菌離心管中，以400g離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基 內(nèi)一起過(guò)濾。

注意：不要以過(guò)濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。