1分鐘前 湖北原位雜交技術服務至上「貝科新肽」[貝科新肽a5f8c59]內容：FISH是原位雜交技術大家族中的一員，因其所用探針被熒光物質標記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末 被發明，現已從實驗室逐步進入臨床診斷領域。基本原理是熒光標記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復性；通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象（即維持其原位）的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環境構成污染，靈敏度能得到保障，可進行多色觀察分析，因而可同時使用多個探針，縮 短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術障礙。

原位雜交（In situ hybridazation）

固定

收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養，到達所需要的發育時期時，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時后用50%2%多聚甲醛溶液洗，然后換成，在-20C 保存，待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養，可阻斷色素的形成)

原位雜交第二天

1.

1）將探針回收，放于－20C保存(通常探針可重復使用十次左右)。

2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。

3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。

4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。

2.

1）用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。

2）室溫下加1ml 1：2：7溶液，時間為一小時。

3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過夜。

生物領域應用原位雜交技術的例子：

物種進化與系統發生學研究：在物種進化與系統發生學研究中，原位雜交技術可以用于檢測物種之間的親緣關系和進化歷程。例如，可以比較不同物種之間特定基因序列的差異，進而研究它們的親緣關系和進化歷程。

原位雜交技術在基因表達和調控、細胞分化與發育、研究和物種進化與系統發生學等領域都有廣泛的應用價值，為深入探究生命現象、促進生物技術的發展提供了有力的技術支持。