血管生成技術(shù)

一、服務(wù)介紹

zhong瘤血管生成是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程，一般包括包括血管內(nèi)皮基質(zhì)降解、內(nèi)皮細(xì)胞移行、內(nèi)皮細(xì)胞增殖、內(nèi)皮細(xì)胞管道化分支形成血管環(huán)和形成新的基底膜等步驟。由于zhong瘤組織這種新生血管結(jié)構(gòu)及功能異常，且血管基質(zhì)不完善，這種微血管容易發(fā)生滲漏，因此腫liu細(xì)胞不需經(jīng)過(guò)復(fù)雜的侵襲過(guò)程而直接穿透到血管內(nèi)進(jìn)入血流并在遠(yuǎn)隔部位形成轉(zhuǎn)移。用200μ的移液槍反復(fù)、快速地吹打平皿中的液體，轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，于4C1500rpm離心5分鐘，倒掉上清，以10ml胰酶重懸沉淀，放在37C水浴中消化30分鐘，且每隔五分鐘輕輕晃動(dòng)，使之充分消化。

血管生成（Angiogenesis）是指源于已存在的mao細(xì)血管和毛xi血管后微靜脈新的mao細(xì)血管性血管的生長(zhǎng)。無(wú)論原發(fā)性zhong瘤還是繼發(fā)性zhong瘤，一旦生長(zhǎng)直徑超過(guò)1~2 mm，都會(huì)有血管生成。這是由于zhongt瘤細(xì)胞自身可分泌多種生長(zhǎng)因子，誘導(dǎo)血管生成。消化傳代后細(xì)胞呈短梭形或三角形,單層生長(zhǎng),鋪路石狀,Ⅷ因子表達(dá)陽(yáng)性,呈指數(shù)增殖。

流式細(xì)胞分選

流式細(xì)胞分選技術(shù)是利用流式細(xì)胞分選儀，以高能量激光照射高速流動(dòng)狀態(tài)下被熒光色素染色的單細(xì)胞或微粒,測(cè)量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強(qiáng)度,從而對(duì)細(xì)胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測(cè)的--種現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù)，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強(qiáng)度和波長(zhǎng)將發(fā)光顆粒亞群分開(kāi)并可實(shí)現(xiàn)單ke隆分選，能復(fù)雜樣本中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類(lèi)、定量和分離,單次可同時(shí)對(duì)其中一種到四種特定細(xì)胞進(jìn)行超高速分選純化、高通量單分選或細(xì)胞芯片制備。分選后的細(xì)胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細(xì)胞PCR擴(kuò)增或原位雜交等，可進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細(xì)胞之間的差異化研究。硬件中樣本細(xì)胞丟棄的比例低于5%，保證樣本中目標(biāo)細(xì)胞的高回收率。方法利用24h內(nèi)新生小鼠顱骨和4~8周齡成年小鼠四肢長(zhǎng)分別分離、培養(yǎng)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞，采用間接接觸的培養(yǎng)模式將接種了骨sui單核細(xì)胞的玻片或骨片置入提前24h接種了成骨細(xì)胞的培養(yǎng)皿中進(jìn)行共培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染及解決方法

原生動(dòng)物污染

原生動(dòng)物污染后，細(xì)胞培養(yǎng)基變得輕微渾濁。在顯微鏡下，大量的小點(diǎn)來(lái)回移動(dòng)。雖然此時(shí)細(xì)胞仍能生長(zhǎng)，但繁殖速度減慢，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好，邊緣不清，變得不透明。原生動(dòng)物與細(xì)胞形成共生關(guān)系。同時(shí)，原生動(dòng)物與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)。這種共生現(xiàn)象非常普遍，但以細(xì)胞為主，因?yàn)樵鷦?dòng)物的數(shù)量相對(duì)較少，因而對(duì)細(xì)胞的正常生長(zhǎng)沒(méi)有影響，只有當(dāng)它們達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，才終爆發(fā)成為循環(huán)。使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養(yǎng)板中，將細(xì)胞接種于小室中，利用培養(yǎng)液成分的差異誘導(dǎo)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力的差異。

解決方法：原生動(dòng)物污染的原因有很多，如液體消毒問(wèn)題、操作問(wèn)題、環(huán)境問(wèn)題等，如果細(xì)胞足夠，果斷丟棄被污染的細(xì)胞和復(fù)蘇細(xì)胞。如果要保留，需要購(gòu)買(mǎi)使用相關(guān)的滅菌試劑。