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公司基本資料信息
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實(shí)驗(yàn)原理
高架十字迷宮(the elevated plus maze,EPM)是評(píng)價(jià)嚙齒類動(dòng)物焦躁反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法 , 相較傷害性刺激所致小鼠焦躁行為檢測(cè)(如電刺激 、 噪聲刺激 、 飲食剝奪和暴露在捕食者氣味等), 該實(shí)驗(yàn)具有操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn) , 能直觀反映小鼠的條件應(yīng)答 。 EPM實(shí)驗(yàn)是在高架Y型迷宮的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的 。 EPM由開臂(open arms和閉臂(closed arms)各兩條組成 , 呈十字形交叉 , 交義部分為中央?yún)^(qū) , 距地面有一定高度 。其原理是由于面對(duì)新事物開臂 小鼠會(huì)產(chǎn)生好奇心去探究 , 而它們有嗜暗的天性(閉臂), 兩者之間發(fā)生探究與回避的沖突行為,產(chǎn)生焦躁心理。整個(gè)迷宮距離地面的高度相當(dāng)于人類站在懸崖邊,易導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)生恐懼不安的心理。可以通過對(duì)比小鼠在開臂和閉臂內(nèi)的滯留時(shí)間和路程來評(píng)價(jià)小鼠的焦躁行為。
EPM實(shí)驗(yàn)在藥品開發(fā)和研究中得到廣泛的應(yīng)用:主要用于苯二氮卓類藥品的抗焦躁作用研究 及篩選具有抗焦l慮作用的新藥,也被用于研究精神性藥品濫用的影響及激s素的功能,應(yīng)激對(duì)生殖、衰老、妊s娠的影響等。抗焦l慮藥主要選擇性地抑制邊緣系統(tǒng) 的海馬、杏仁核 ,產(chǎn)生抗焦躁作用。
ROS也就是活性氧(reactive oxygen species,ROS)指來源于氧的自由基和非自由基。ROS在細(xì)胞生命,應(yīng)激和si亡中具介導(dǎo)作用,并且不同濃度的ROS在其中起著截然不同的作用,從而導(dǎo)致細(xì)胞命運(yùn)的不同。因此對(duì)ROS的濃度或相對(duì)水平進(jìn)行可靠的測(cè)量非常有必要。
實(shí)驗(yàn)儀器和材料
細(xì)胞培養(yǎng)基
胎牛xue清
青mei素/鏈mei素
胰酶
PBS
DMSO
活性氧(ROS)試劑盒
血球計(jì)數(shù)板
CO2培養(yǎng)箱
倒置熒光顯微鏡
實(shí)驗(yàn)步驟1、細(xì)胞傳代培養(yǎng):當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至80-90%時(shí),去除培養(yǎng)基,加入PBS洗1-2次,去除PBS后,加入1ml胰酶消化1-3min后,加入3ml完全培養(yǎng)基中和胰酶終止消化,將消化的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min。倒掉上清后,加入3ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1:3傳代至培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。
2、將長(zhǎng)到培養(yǎng)皿80%-90%的內(nèi)皮細(xì)胞用胰酶消化下來,1000rpm離心,去除上清,加入完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,將細(xì)胞分別種在6孔板中,每孔種1×106個(gè)細(xì)胞。3、待細(xì)胞貼壁后,使用不同的含藥xue清的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。3、待細(xì)胞貼壁后,使用不同的含藥xue清的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。4、48h后,加入DCFH-DA于培養(yǎng)基中,稀釋倍數(shù)為1:1000。5、孵育1h后,直接將細(xì)胞置于熒光顯微鏡下拍照。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果