自噬(autophagy)是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器，終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過程,自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu),內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)、長(zhǎng)壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細(xì)胞器如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、

病毒和細(xì)菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被于檢測(cè)自噬體形成的特異性標(biāo)記染色劑,其檢測(cè)激發(fā)濾光片波長(zhǎng)355nm ,阻斷濾光片波長(zhǎng)512nm。Leagene MDC染色液適用于培養(yǎng)細(xì)胞的自噬染色，可與EB合用雙染。

透射電鏡觀察:可見凋亡細(xì)胞表面微絨毛消失，核染色質(zhì)固縮、邊.集，常呈新月形，核膜皺褶，胞質(zhì)緊實(shí)，細(xì)胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和調(diào)亡小體被臨近巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象。

結(jié)果評(píng)判:調(diào)亡細(xì)胞體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮。觀察消化也可以用肉眼，當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)zhen孔空隙時(shí)終止消化。調(diào)亡I期( pro-apoptosis nuclei)的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象( cavitati)的空泡結(jié)構(gòu); IIa 期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生調(diào)亡小體。

Q:如何避免中沉淀物的出現(xiàn)？

A:首先要注意正確的解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時(shí)間均勻而緩慢的搖動(dòng)。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：

（1）熱滅活；

（2）在 37℃ 下培養(yǎng)；

（3）反復(fù)凍融；

（4）γ 射線照射；

（5）長(zhǎng)期儲(chǔ)存在 2-8℃；

（6）在室溫下放置時(shí)間過長(zhǎng)

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除這些絮狀沉淀物，可以將分裝到無菌離心管中，以 400g 離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基 內(nèi)一起過濾。

注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。