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公司基本資料信息
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自噬(autophagy)是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質或細胞器,終將吞食物在溶酶體內降解的過程,自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結構,內含細胞質、長壽蛋白質和異常蛋白聚集物,損傷或多余細胞器如線粒體、粗面內質網和微體、
病毒和細菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC是一種熒光色素,是嗜酸性染色劑,通常被于檢測自噬體形成的特異性標記染色劑,其檢測激發濾光片波長355nm ,阻斷濾光片波長512nm。Leagene MDC染色液適用于培養細胞的自噬染色,可與EB合用雙染。
透射電鏡觀察:可見凋亡細胞表面微絨毛消失,核染色質固縮、邊.集,常呈新月形,核膜皺褶,胞質緊實,細胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和調亡小體被臨近巨噬細胞吞噬現象。
結果評判:調亡細胞體積變小,細胞質濃縮。觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發白并出現細zhen孔空隙時終止消化。調亡I期( pro-apoptosis nuclei)的細胞核內染色質高度盤繞,出現許多稱為氣穴現象( cavitati)的空泡結構; IIa 期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;細胞凋亡的晚期,細胞核裂解為碎塊,產生調亡小體。
Q:如何避免中沉淀物的出現?
A:首先要注意正確的解凍步驟,而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動。我們已經發現在下列情況下沉淀物可能增加,使用中應該盡量避免:
(1)熱滅活;
(2)在 37℃ 下培養;
(3)反復凍融;
(4)γ 射線照射;
(5)長期儲存在 2-8℃;
(6)在室溫下放置時間過長
Q:如何去除中的沉淀?
A:如想去除這些絮狀沉淀物,可以將分裝到無菌離心管中,以 400g 離心,上清液即可直接加入到培養基 內一起過濾。
注意:不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物,因為這可能阻塞濾膜。