5分鐘前 細胞實驗外包在線咨詢「英瀚斯」[英瀚斯2eefa30]內容：Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測試劑。WST-8【化學名：2-(2-甲氧ji-4-硝ji苯ji)-3-(4-硝ji苯ji)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，是一種類似于MTT的化合物，它在電子載體1-甲氧ji-5-甲ji吩嗪鎓硫酸二jia酯（1-Methoxy PMS）存在的情況下，被線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產物（formazan）。細胞增殖越多越快，顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺，對于同樣的細胞，顏色的深淺與活xi胞的數量成正比，因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。貼壁細胞:先倒出培養液，采用胰蛋白酶消化或者用細胞刮(會產生碎屑)刮下:帶培養液進行離心，100-1500/mim510min。

細胞培養中常見的生物污染包括細菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。這些污染在細胞培養中的特點及相應的解決辦法如下：

1.細菌污染

細菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細砂狀。根據gan染菌的種類不同，可能會呈現不同的形狀，培養液一般會變得渾濁、黃色，對細胞生長有明顯影響。

解決方法：仔細檢查器具的滅菌情況，確保通風時間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養基接觸的移液管等物品如果被污染兩次，則可能會導致儲存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要檢查培養基的渾濁度。此外，建議在培養基中添加抗生su。而經過雜交瘤測序，可以獲得相應的序列，可以以重組蛋白的方式來穩定獲得。

Q:中的沉淀物對細胞培養有什么影響？

A:（1）細胞生長，我們的試驗以及經驗表明沉淀物不會影響細胞培養，我們的客戶以及其它生產商也證明了這一點。

（2）過濾，如果中出現大量的沉淀物，將很難過濾。一般說來，因為在生產工序中已經過 100nm 或者 40nm 的過濾處理，并且經過了嚴格的無菌檢測，因此不推薦再過濾用于細胞培養 的。在實驗室中沒有必要再過濾處理，在大規模的細胞培養中往往將直接加到培養基中一起 過濾。3D細胞培養3D多細胞腫liu球是在體外應用組織培養方法使腫liu細胞以多細胞集聚體的形式生長成為具有三維結構的球體。

（3）污染，磷酸鈣往往被誤認為微生物污染而引起。研究者可能會在中觀察到一些絮狀的 沉淀，因此就會比較警覺的去做無菌試驗，將放在培養箱中培養幾天，結果可能會觀察到更多的絮狀 沉淀，因此就斷定被污染了。并且當研究者將樣品放在倒置顯微鏡下觀察時往往可以看到一些可 以運動的小黑點，因此就更加確認是被污染了。于是，研究者就會花費更多的時間和精力來和生產商 確認，但終確定沒有被污染而只是沉淀。為了避免這些問題的發生，我們建議不要直接將放在 培養箱中培養觀察是否有菌，而是將加到瓊脂板上進行培養以觀察是否有細菌生長。方法利用24h內新生小鼠顱骨和4~8周齡成年小鼠四肢長分別分離、培養成骨細胞和破骨細胞，采用間接接觸的培養模式將接種了骨sui單核細胞的玻片或骨片置入提前24h接種了成骨細胞的培養皿中進行共培養。另外，也可以進 行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認是否有污染。