大鼠主動脈內皮細胞的分離培養

方法：分離大鼠主動脈,直接貼壁于培養皿中,熒光倒置顯微鏡觀察細胞形態,免yi組化Ⅷ因子相關抗原染色鑒定細胞.結果:約24小時組織塊邊緣有游離的 新生細胞長出,7天即融合成片.消化傳代后細胞呈短梭形或三角形,單層生長,鋪路石狀,Ⅷ因子表達陽性,呈指數增殖.凍存后復蘇細胞活性均超過90%.結 論:用貼壁法成功建立了大鼠血管內皮細胞體外培養方法,凍存細胞存活率高,為體外研究提供了穩定的模型.

透射電鏡觀察自噬小體方法

利用光學顯微鏡，借助相應的染色方法，可以觀察細胞凋亡時會出現的一系列形態特征。常用的染色法包括臺盼藍、橙 / 化乙啶（AO/EB）、Giemsa 和 HE 法等。在光學顯微鏡下可以觀察到核固縮、質濃縮和凋亡小體等典型的凋亡現象。

電鏡形態學觀察法是一種比較經典、可靠的方法，被認為是確定細胞凋亡的金標準。電鏡下凋亡細胞表現為染色質凝集、核濃縮、核裂解、胞漿收縮和胞膜具有發泡現象及凋亡小體出現等。

BrdU染色原理

BrdU (5-脫氧尿核苷)是胸腺的衍生物，常用于標記中新合成的DNA,可代替胸腺選擇性整合到細胞中新合成的DNA中(細胞周期S期)。管底的細胞團不要打散，沿管壁倒入適量(一般為材料體積的5-10倍)的2。這種摻入可以穩定存在，隨著DNA進入子細胞中BrdU特異性可以用于檢測BrdU的摻入，從而判斷細胞的增殖能力。BrdU特異性可以用于檢測BrdU的摻入，從而判斷細胞的增殖能力。

zhu射或細胞培養后利用抗Brdu單，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。由于zhong瘤組織這種新生血管結構及功能異常，且血管基質不完善，這種微血管容易發生滲漏，因此腫liu細胞不需經過復雜的侵襲過程而直接穿透到血管內進入血流并在遠隔部位形成轉移。因組織細胞內無內源性Brdu存在，所以Brdu應用較廣摻入雙鏈DNA內的Brdu,以氫鏈與腺呤結合，不能直接與抗Brdu反應，需經解鏈使Brdu暴露方能被染色。常用的解鏈方法為鹽酸加熱、蛋白酶處理等，使DNA雙鏈部分單鏈化，抗Brdu小鼠單與增殖細胞核內的Brdu結合，再經酶標抗小鼠IgG孵育、

細胞培養中常見的污染及解決方法

原生動物污染

原生動物污染后，細胞培養基變得輕微渾濁。在顯微鏡下，大量的小點來回移動。雖然此時細胞仍能生長，但繁殖速度減慢，細胞生長狀態不好，邊緣不清，變得不透明。原生動物與細胞形成共生關系。軟gu細胞培養(1)豚鼠脫頸處死，備皮，用75%酒精消毒背部及四肢皮膚。同時，原生動物與細胞競爭營養。這種共生現象非常普遍，但以細胞為主，因為原生動物的數量相對較少，因而對細胞的正常生長沒有影響，只有當它們達到一定數量時，才終爆發成為循環。

解決方法：原生動物污染的原因有很多，如液體消毒問題、操作問題、環境問題等，如果細胞足夠，果斷丟棄被污染的細胞和復蘇細胞。如果要保留，需要購買使用相關的滅菌試劑。