大腸實驗步驟(—)培養基1、普通乳糖蛋白胨培養液亞硫酸鈉培養基（供平板分離用）蛋白胨 10g， 乳糖 10g，K2HPO4 3.5g，瓊脂 15～20g，蒸餾水1000mL，無水亞硫酸鈉 5g，5％的堿性品紅乙醇溶液 20mL，pH 7.2~7.4。4、培養基（EMB培養基）（供發酵法平板分離用，3和4可任選一種）蛋白胨10g，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，2％伊紅（曙紅）水溶液 20mL，5％美藍（亞甲藍）水溶液13mL，pH 7.2~7.4。(二)滅菌移液管、滅菌稀釋水、試管、杜漢氏小管、革蘭氏染色液、滅菌培養皿。(一)水樣的采集供細菌學檢驗的水樣，必須按一般無菌操作的基本要求采集，并保證再運送、貯存過程中不受污染。水樣從采集到檢驗不應超過4h ，在0～4℃下保存不應超過24h ，如不能在4h 內分析，應在檢驗報告上注明保存時間和條件。1、自來水取樣：應在水打開放水5min ，再用無菌容器接取水樣，待分析。如水樣內含有余氯，則采樣瓶滅菌后按每500mL水樣加3％Na2S2O3.5H2O溶液1mL。2、江、河、湖、池自然水體取樣：可用采樣器，采樣瓶應先滅菌。采樣后，瓶內應留有空隙。如果與其他化驗項目聯合取樣，細菌學分析水樣應采在其他樣品之前。

大腸檢測注意事項

1. 實驗需要多組求平均，數據才能夠有信服力，此外，空白對照組也是需要的。

2. 實驗中要記錄好實驗時間地點等。

3. 水樣取出需要取樣器，取樣瓶用之前需要滅菌。

其他

1. 水中大腸菌群的檢測方法，常用多管發酵法和濾膜法。多管發酵法可適用于各種水樣的檢驗，但操作繁瑣，需要的時間較長。濾膜法僅適用于自來水和深井水，操作簡單、快速，但不適用于雜質較多、易于堵塞濾孔的水樣。

2. 若實驗所測定的15支管中均為陽性反應，說明濃水樣污染嚴重，可將樣品進一步稀釋后，再按上述方法接種、培養和觀察。

該檢測方法是普遍采用的檢測方法,相比我準的檢測方法,如多管發酵及濾膜法具簡便快捷，其選擇性培養基具有抑制雜菌的作用，假陽性低

酶底物法為GB5750-2006收錄的用于大腸檢測標準方法，酶底物法是目前水中大腸檢測的方法，目前以其方便快捷，假陽性低，適用大量樣品快速檢測等優點正逐步被國內檢測所認可。

相對于多管發酵和濾膜法，酶底物法檢測步驟大大減少，而且對實驗環境要求不高，檢測時間可減少到24小時，在日常水樣監測及應急監測中具有很好的應用前景，可及時檢測，預防，較大限度的減少重大公共安全事故的發生幾率。

檢測原理：

該檢測方法采用大腸產生β-半乳糖苷酶分解色源底物-onPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)使培養液呈黃色。大腸埃希氏菌產生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4 - methyl-umbelliferyl-β-glucuronide）使培養液在波長366 nm 紫外光下產生熒光的原理,來定性定量水中總大腸菌群、糞大腸菌群（耐熱大腸菌群）及大腸埃希氏菌。