大腸實(shí)驗(yàn)步驟(—)培養(yǎng)基1、普通乳糖蛋白胨培養(yǎng)液亞硫酸鈉培養(yǎng)基（供平板分離用）蛋白胨 10g， 乳糖 10g，K2HPO4 3.5g，瓊脂 15～20g，蒸餾水1000mL，無水亞硫酸鈉 5g，5％的堿性品紅乙醇溶液 20mL，pH 7.2~7.4。4、培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）（供發(fā)酵法平板分離用，3和4可任選一種）蛋白胨10g，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，2％伊紅（曙紅）水溶液 20mL，5％美藍(lán)（亞甲藍(lán)）水溶液13mL，pH 7.2~7.4。(二)滅菌移液管、滅菌稀釋水、試管、杜漢氏小管、革蘭氏染色液、滅菌培養(yǎng)皿。(一)水樣的采集供細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的水樣，必須按一般無菌操作的基本要求采集，并保證再運(yùn)送、貯存過程中不受污染。水樣從采集到檢驗(yàn)不應(yīng)超過4h ，在0～4℃下保存不應(yīng)超過24h ，如不能在4h 內(nèi)分析，應(yīng)在檢驗(yàn)報(bào)告上注明保存時(shí)間和條件。1、自來水取樣：應(yīng)在水打開放水5min ，再用無菌容器接取水樣，待分析。如水樣內(nèi)含有余氯，則采樣瓶滅菌后按每500mL水樣加3％Na2S2O3.5H2O溶液1mL。2、江、河、湖、池自然水體取樣：可用采樣器，采樣瓶應(yīng)先滅菌。采樣后，瓶?jī)?nèi)應(yīng)留有空隙。如果與其他化驗(yàn)項(xiàng)目聯(lián)合取樣，細(xì)菌學(xué)分析水樣應(yīng)采在其他樣品之前。

大腸檢測(cè)注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)需要多組求平均，數(shù)據(jù)才能夠有信服力，此外，空白對(duì)照組也是需要的。

2. 實(shí)驗(yàn)中要記錄好實(shí)驗(yàn)時(shí)間地點(diǎn)等。

3. 水樣取出需要取樣器，取樣瓶用之前需要滅菌。

其他

1. 水中大腸菌群的檢測(cè)方法，常用多管發(fā)酵法和濾膜法。多管發(fā)酵法可適用于各種水樣的檢驗(yàn)，但操作繁瑣，需要的時(shí)間較長(zhǎng)。濾膜法僅適用于自來水和深井水，操作簡(jiǎn)單、快速，但不適用于雜質(zhì)較多、易于堵塞濾孔的水樣。

2. 若實(shí)驗(yàn)所測(cè)定的15支管中均為陽性反應(yīng)，說明濃水樣污染嚴(yán)重，可將樣品進(jìn)一步稀釋后，再按上述方法接種、培養(yǎng)和觀察。

該檢測(cè)方法是普遍采用的檢測(cè)方法,相比我準(zhǔn)的檢測(cè)方法,如多管發(fā)酵及濾膜法具簡(jiǎn)便快捷，其選擇性培養(yǎng)基具有抑制雜菌的作用，假陽性低

酶底物法為GB5750-2006收錄的用于大腸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法，酶底物法是目前水中大腸檢測(cè)的方法，目前以其方便快捷，假陽性低，適用大量樣品快速檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)正逐步被國內(nèi)檢測(cè)所認(rèn)可。

相對(duì)于多管發(fā)酵和濾膜法，酶底物法檢測(cè)步驟大大減少，而且對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求不高，檢測(cè)時(shí)間可減少到24小時(shí)，在日常水樣監(jiān)測(cè)及應(yīng)急監(jiān)測(cè)中具有很好的應(yīng)用前景，可及時(shí)檢測(cè)，預(yù)防，較大限度的減少重大公共安全事故的發(fā)生幾率。

檢測(cè)原理：

該檢測(cè)方法采用大腸產(chǎn)生β-半乳糖苷酶分解色源底物-onPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)使培養(yǎng)液呈黃色。大腸埃希氏菌產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4 - methyl-umbelliferyl-β-glucuronide）使培養(yǎng)液在波長(zhǎng)366 nm 紫外光下產(chǎn)生熒光的原理,來定性定量水中總大腸菌群、糞大腸菌群（耐熱大腸菌群）及大腸埃希氏菌。